本文提供由艾美捷Bethyl Laboratories推出的靶向人及小鼠LATS1（大肿瘤抑制激酶1）的兔源多克隆抗体（货号A300-477A）的完整技术参数、标准化实验流程及功能应用要点。该抗体适用于细胞周期调控、Hippo信号通路及肿瘤抑制机制研究。

一、产品基本特性

该抗体为兔多克隆抗体，以全IgG形式提供，未经标记。其特异性靶点为LATS1（又称WARTS、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶LATS1），同时识别人和小鼠样本，适用于跨物种比较研究。

抗体经抗原亲和纯化处理：采用固相载体上固定的LATS1特异性表位进行吸附洗脱，有效去除血清非特异性IgG，确保高纯度与低背景。免疫原对应人LATS1蛋白第50至100位氨基酸区域（参考SwissProt条目O95835，基因ID 9113）。该表位位于蛋白N端调控区，远离C端激酶结构域，避免了与其他NDR家族激酶（如LATS2、NDR1/2）的交叉识别。

抗体浓度标定为200 µg/ml（采用比尔定律，1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4），较同类产品浓度适中，适合常规实验用量。

二、储存与缓冲体系

储存条件：2 – 8°C冷藏，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性聚合，显著降低效价。

有效期：收货之日起1年。未开封且严格避光、避免温度波动的情况下可维持完整活性。

缓冲液组成：Tris缓冲盐水，含0.1% BSA（牛血清白蛋白）作为稳定蛋白，以及0.09%叠氮钠作为防腐抗菌剂。

注意事项：BSA的存在有助于防止抗体在低浓度下吸附管壁，但叠氮钠会抑制HRP活性。若后续使用HRP标记二抗进行化学发光检测，需通过充分洗涤（至少5次，每次5分钟）去除叠氮钠，或选用不含叠氮钠的替代缓冲体系。对于直接偶联HRP的一抗，本产品不适用。

三、推荐应用与操作流程

1. 免疫沉淀 (IP)

抗体用量：6 µg抗体 / mg总蛋白裂解物。以一碟10 cm培养皿的哺乳动物细胞（80–90%融合度）为例，总蛋白量约为1–2 mg，推荐添加12 µg抗体（即60 µl原液）。

裂解液选择：推荐使用非变性IP裂解缓冲液（如50 mM Tris-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% NP-40 或 0.5% Triton X-100），并新鲜加入蛋白酶抑制剂（PMSF、cocktail）和磷酸酶抑制剂（如NaF、Na3VO4）。LATS1在Hippo通路中受磷酸化调控，保留磷酸化状态对于功能分析至关重要。

操作步骤：澄清裂解液与抗体于4°C旋转孵育2小时至过夜（过夜富集效率更高）。随后加入Protein A/G磁珠或琼脂糖珠，继续孵育1–2小时。磁珠用裂解缓冲液洗涤3–5次后，加入含DTT的SDS上样缓冲液，95°C变性5分钟。

2. 蛋白质印迹 (WB)

工作稀释度：1:5000 – 1:15,000。该范围较宽，充分体现了抗体的高灵敏度。初次实验建议从1:5000起始；若信号过强或背景偏高，可逐级稀释至1:10,000或1:15,000。

凝胶体系：LATS1分子量约123–130 kDa，可采用常规7.5%或10% Tris-甘氨酸凝胶进行分离。若需同时检测小分子量蛋白，可选择梯度凝胶（4–20%）。

封闭与稀释液：含5%脱脂奶粉的TBST（Tris-缓冲盐 + 0.1% Tween-20）。避免使用BSA，因可能导致非特异性背景。

一抗孵育：4°C过夜（12–16小时）。短时室温孵育不足以检测低丰度信号，尤其在研究磷酸化调控中的迁移变化时。

二抗选择：

细胞裂解物直接WB：使用山羊抗兔IgG（H+L）HRP二抗（如A120-101P），按1:5000–1:20000稀释。

IP后WB检测：免疫沉淀样品中包含兔IgG重链（约55 kDa）和轻链（约25 kDa）。由于LATS1分子量约130 kDa，远高于重链，常规抗兔全IgG二抗基本不受干扰。但若同时检测轻链附近的共沉淀蛋白（约25 kDa），则必须使用抗兔IgG轻链特异性HRP二抗，并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以封闭非特异性Fc受体。

转膜条件：推荐使用0.45 µm PVDF膜，湿转法：100 V，1.5小时（冰浴）或 30 V，4°C过夜。甲醇浓度维持20%以促进蛋白与膜结合。

3. 跨物种应用提示

该抗体已验证小鼠和人反应性。若用于大鼠或其他物种样本，建议通过BLAST比对目标表位区域（人LATS1 50–100残基）的同源性。小鼠LATS1在该区域与人有约95%相似性，预期可识别。

四、靶点生物学背景

LATS1（大肿瘤抑制因子同源物1）是Hippo信号通路的核心激酶，最初在果蝇中作为warts基因的同源物被鉴定，在人类中发挥肿瘤抑制功能。LATS1属于NDR家族（Dbf2相关激酶家族），是有丝分裂退出网络的关键组分。

LATS1的生物学功能主要包括：

负调控G2/M期转变：通过与MOB1、CDC2激酶相互作用，下调CDC2激酶活性，阻滞细胞周期进程，防止异常有丝分裂。

介导Hippo信号转导：在MST1/2激酶磷酸化激活后，LATS1磷酸化下游效应因子YAP和TAZ，促进其细胞质滞留和降解，从而抑制细胞增殖、诱导凋亡。

肿瘤抑制：LATS1表达缺失或功能突变与肉瘤、卵巢癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤相关。LATS1敲除小鼠表现出组织过度生长和肿瘤易感性。

LATS1本身活性受磷酸化调控：MST1/2磷酸化LATS1的Thr1079（在激酶结构域内）及多个疏水基序位点，使其激活。因此，检测LATS1总蛋白和磷酸化形式时，需要高特异性的总抗体。

五、别名与同源性

该抗体识别人和小鼠LATS1的N端50–100残基区域，该区域在哺乳动物中高度保守。常见别称包括：

WARTS蛋白激酶

h-warts

大肿瘤抑制因子同源物1

wts（果蝇同源物命名）

注意：LATS1与LATS2（另一种Hippo通路激酶）在C端激酶结构域有较高同源性，但N端50–100区域差异较大，因此本抗体对LATS1具有特异性，不识别LATS2。